韓春雨

　　因為大面積無法重復(fù)實驗，作者和所在單位又不出面應(yīng)對質(zhì)疑聲，河北科技大學(xué)副教授韓春雨領(lǐng)銜的NgAgo基因編輯技術(shù)的重復(fù)工作已經(jīng)遇冷。

　　自2016年5月2日在《自然-生物技術(shù)》在線發(fā)表論文，NgAgo已經(jīng)問世5個月，韓春雨在論文中描述的NgAgo是一項和目前主流的“基因魔剪”CRISPR擁有同樣效率的基因編輯技術(shù)，能高效地實現(xiàn)對特定DNA片段的敲除、加入。

　　但在近日哥本哈根舉辦的“CRISPR Genome Editing（CRISPR基因編輯）”大會上，美國、丹麥、德國在基因編輯領(lǐng)域頂尖的實驗室參會，卻無人提及NgAgo。

　　美國生物學(xué)家張鋒、詹妮弗·杜德娜（Jennifer Doudna）、喬治·丘奇（George Church）各自所在的實驗室是基因編輯領(lǐng)域的權(quán)威。知情人士向澎湃新聞（www.thepaper.cn）透露，張鋒實驗室無法重復(fù)NgAgo實驗，丘奇實驗室聽聞諸多實驗室無法重復(fù)后，保持觀望。有消息稱，在今年8月召開的一次重量級內(nèi)部學(xué)術(shù)會議上，詹妮弗在問答環(huán)節(jié)被問及是否重復(fù)NgAgo成功，她的回應(yīng)是否定，澎湃新聞尚未證實這一傳言。

　　NgAgo不僅在國外遇冷。9月27－28日，“中國科協(xié)第114期新觀點新學(xué)說學(xué)術(shù)沙龍”召開，主題是“基因組編輯新技術(shù)的興起將帶來的沖擊”。這并非一次沒有分量的學(xué)術(shù)沙龍，國內(nèi)各大高校、機構(gòu)近30位基因編輯領(lǐng)域的學(xué)者聚集于此，其中包括北京大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院教授、中科院院士許智宏以及華大基因楊煥明院士在內(nèi)。韓春雨不在出席代表之列。

　　澎湃新聞（www.thepaper.cn）采訪到3位國內(nèi)基因編輯領(lǐng)域的實驗室PI（項目負責人），他們大多堅持不懈地重復(fù)了近兩個月甚至更久，有的重復(fù)了幾十次NgAgo實驗，投入科研經(jīng)費20萬元；有的在幾百個小鼠基因、動物胚胎上試驗NgAgo技術(shù)，花費10多萬元。令他們失望的共同結(jié)果是：NgAgo實驗不奏效。

　　“據(jù)我了解，絕大多數(shù)實驗室都已停止對NgAgo的重復(fù)。”其中一位PI告訴澎湃新聞，實驗室還有其他項目，沒有再多的精力和財力投入到NgAgo之中。

　　因為不愿被過多打擾和迫于壓力，3位實驗室PI都要求匿名。

　　可能有“幾百家”實驗室重復(fù)實驗，總耗資“幾億美元”

　　來自內(nèi)陸某高校的這位實驗室PI是最早進行NgAgo重復(fù)實驗的科研人員之一。他告訴澎湃新聞，在韓春雨論文在線發(fā)表的第三天，他看到了論文，并在當天晚上提交了實驗設(shè)計，讓學(xué)生開始重復(fù)實驗。論文所描述的NgAgo性能強大，他覺得興奮，直觀的反應(yīng)是生理性的，“雞皮疙瘩起了一身”，“我說 太好了 ，一宿幾乎沒睡。我是基于科學(xué)的激動?！?/p>

　　反差是巨大的。整個5月份，他做了12輪重復(fù)實驗，都失敗。再做，失敗，再做，四個月時間里累計做了數(shù)十次，花了20萬（含人工費），全部重復(fù)實驗都失敗了。

　　另一位來自沿海地區(qū)的實驗室PI也在文章剛發(fā)表后就去合成質(zhì)粒，這是NgAgo重復(fù)實驗必需的材料。他開始在小鼠基因上重復(fù)實驗，每批幾十、上百個小鼠基因，按照韓春雨論文的實驗步驟操作，想看看NgAgo的切割效率如何。兩周后，第一批實驗結(jié)果出來，沒有一個小鼠基因出現(xiàn)了被編輯的跡象。

　　他去問了一圈領(lǐng)域內(nèi)熟識的同行，“他們都沒重復(fù)出來”，有的到Figuer3C（圖3C）能重復(fù)，但一做測序都是假陽性。

　　是不是沒有注意到什么細節(jié)？他去韓春雨所指定的生物公司合成質(zhì)粒，把小鼠細胞替換成293人類細胞，“完全按照他（韓春雨）一模一樣”地重復(fù)實驗，還是失敗。反反復(fù)復(fù)，總共分別做了7、8次小鼠和人類細胞，無一例外地失敗。

　　10多萬人民幣、操作重復(fù)實驗的學(xué)生幾十天的時間、實驗室其他項目放緩的進度，這些都折算在重復(fù)NgAgo實驗失敗的成本里。

　　這位PI向澎湃新聞表示，NgAgo實驗是工具性的、定性定量的，正是因為韓春雨在論文中所描述的NgAgo太高效了（21.3% 41.3%），并在40多個位點都保持高效率，還沒有序列限制，所以全球基因編輯領(lǐng)域的實驗室才立即跟進。

　　“如果說一般般的效率，沒人會去重復(fù)，因為大家用CRISPR已經(jīng)用得很好?！彼浪?，國內(nèi)外有幾百個實驗室進行NgAgo實驗，加上人力成本，所耗費的資金或許可達幾億美元。

　　第三位實驗室PI來自北方某研究機構(gòu)，他沒有統(tǒng)計過實驗室為NgAgo投入了多少錢，“肯定的是，至少有一個學(xué)生兩個月的時間浪費在上面，而且我們在合成基因上也花了不少錢，做了很多小鼠實驗，這個花費會更多一些。我們做了好幾百個胚胎，沒有確切的結(jié)果。所以還是比較令人失望的事情?！?/p>

　　“我有兩個學(xué)生，獨立地在重復(fù)，嚴格地按照他（韓春雨）發(fā)表的細胞系，他發(fā)表的序列和他描述的方法，我們也嘗試了去改進，但沒有陽性結(jié)果。所以我們也就不想再在這上面浪費時間了。”這位PI說，整個過程他經(jīng)歷了從驚訝、興奮到最后的失望。

　　PI們的一些反駁和疑惑

　　疑惑和爭議還不只是對待屢試屢敗的重復(fù)實驗結(jié)果。上述實驗室PI們對韓春雨的一些說法進行了反駁。

　　韓春雨公開回應(yīng)，實驗需要“高超的技巧”，并曾向澎湃新聞表示，80%的重復(fù)實驗是因為細胞被污染，因為總是學(xué)生在操作實驗，沒有接受過嚴格的科研訓(xùn)練。來自沿海地區(qū)的這位PI則告訴澎湃新聞，NgAgo實驗很簡單，“隨便一個新入學(xué)的博士，訓(xùn)練一個星期就可以做得很好”，并提及完成整個實驗僅需一個星期，并非韓春雨所說“一個月還沒做完一輪”。

　　對于涉及“實驗機密”問題，該PI表示，“不存在保守技術(shù)涉密的，保守技術(shù)就不要發(fā)文章，僅申請專利也行”，論文一旦刊發(fā)，意味著有義務(wù)在科學(xué)共同體內(nèi)共享能讓實驗順利進行的信息。這對作者而言并非沒有益處，能讓更多的同行重復(fù)成功，可以建立起自己在科學(xué)共同體內(nèi)的聲譽，這對科學(xué)家來說并非可有可無，而是至關(guān)重要的，關(guān)系到今后學(xué)術(shù)論文發(fā)表。

　　作為解決同一問題的技術(shù)，CRISPR在誕生之初是不是如韓春雨所說效率“只有1%”？上述PI告訴澎湃新聞：“CRISPR在一兩周內(nèi)就重復(fù)出來了，而且開放共享。剛出來的效率非常高，而且意外地高，我們都很驚訝?！?/p>

　　是否有陣營之間相互打壓之說？在網(wǎng)絡(luò)流傳的一段電話錄音里，韓春雨對一位外校學(xué)生表示，NgAgo的成功會讓CRISPR陣營失去上億元，暗示CRISPR陣營正在打壓NgAgo。來自北方某個研究機構(gòu)的PI否定了這個說法，“科學(xué)就是就事論事，你別提以前誰做什么的。根本不是陣營的問題，這就是科學(xué)?！?/p>

　　在韓春雨共享給同行的質(zhì)粒上，兩位PI無一不表示了困惑。

　　其中一位PI透露，自己曾派學(xué)生前往石家莊，希望韓春雨能提供論文中的質(zhì)粒，但拿回去后PI發(fā)現(xiàn)，“他沒有給我們這個原本的質(zhì)粒，他給的是一個編碼酶的基因在細菌里表達的載體（論文中為在人類細胞表達的載體）?！倍鳱gAgo酶要工作，必須在一個合適的載體上。

　　另一位PI反映了類似的信息，PI的一位同行朋友同樣派人去了石家莊，但“韓春雨給的質(zhì)粒信息不全，都很奇怪。有的質(zhì)粒沒有promoter（啟動子）有些沒有stop codon（終止密碼子）（注：這兩個等同于“開關(guān)”，沒有前者基因不能表達成蛋白質(zhì)，沒有后者蛋白質(zhì)翻譯無法停止）?！?/p>

　　PI們都向澎湃新聞表示了擔憂，NgAgo技術(shù)的大面積無法重復(fù)或?qū)⒂绊懼袊蒲姓哒w的國際學(xué)術(shù)聲譽，“以后看到中國出來的（論文）都會懷疑一下。”

　　“我覺得確實，重要的是，國內(nèi)的這個領(lǐng)域應(yīng)該是有一個明確的聲音來質(zhì)疑這件事情，否則大家會覺得中國的這個領(lǐng)域是沒有客觀性的。也就是說，你可能需要一個自我糾錯能力吧？”其中一位PI說。

　　在“中國科協(xié)第114期新觀點新學(xué)說學(xué)術(shù)沙龍”上，數(shù)十位基因編輯領(lǐng)域?qū)＜疫_成了八條共識，其中包含了以下內(nèi)容：

　　“ 科學(xué)家必須自律，行業(yè)要有行規(guī) ，基因組編輯技術(shù)威力巨大，科學(xué)工作者應(yīng)加強自身的科學(xué)素養(yǎng)，摒棄急功近利，認真踏實、穩(wěn)扎穩(wěn)打地做好研究，努力建設(shè)培養(yǎng)良好的學(xué)術(shù)風氣和研究氛圍?！?/p>